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PCR技術(shù)

發(fā)布時(shí)間： 2025-05-12　　點(diǎn)擊次數(shù)： 732次

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)由美國(guó)生物化學(xué)家凱利·穆利斯于1983年發(fā)明，其核心原理是通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個(gè)步驟的循環(huán)，利用DNA聚合酶特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。

早期的PCR擴(kuò)增受限于耐高溫酶的缺失，效率非常低，因此在科研實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域接受度并不高。

直至1986年，水生棲熱菌來源的Taq酶的應(yīng)用，才實(shí)現(xiàn)PCR穩(wěn)定、自動(dòng)化的高效擴(kuò)增。

PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)一直以來不斷發(fā)展，例如基于普通PCR技術(shù)通過優(yōu)化反應(yīng)流程而衍生的巢式PCR、基于熱啟動(dòng)酶提高擴(kuò)增特異性的Hot start PCR、基于熒光檢測(cè)技術(shù)而發(fā)展qPCR、基于芯片微孔擴(kuò)增實(shí)現(xiàn)更高精度分析的數(shù)字PCR等。
一般，正常的PCR反應(yīng)過程會(huì)經(jīng)歷3個(gè)核心階段：
1 高溫95℃解開DNA模板（熱變性）
2 降溫45-60℃使特異性引物與單鏈DNA互補(bǔ)結(jié)合（退火）
3 再次升溫至72℃，耐熱Taq DNA聚合酶沿模板從引物3'端開始合成互補(bǔ)鏈（延伸）

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