-
要做好CCK-8實驗，這三個重要環節請注意
發布時間： 2024-04-17 點擊次數： 1887次在做細胞基礎實驗時，必要的一步就是需要探究清楚細胞的增殖變化和毒性耐藥變化情況，為下一步實驗做準備。
我們在做CCK-8增殖和毒性實驗中常常會遇到一下幾個問題：
1.細胞鋪板問題 2.給CCK-8的方式問題 3.CCK-8的反應時間問題
首先，在進行細胞鋪板時， 需要用血球計數板進行細胞計數，得到細胞數量后按照所需鋪板的細胞數量進行調整。一般96孔板鋪板數量為1*10^6/孔。
制備細胞懸液時需要反復吹打，使細胞懸液充分混勻，降低出現細胞團塊的幾率。一般96孔板，每孔加入100微升細胞懸液，從孔的9點鐘方向打入，加入半張板子時，需要再次將細胞吹勻，然后繼續加剩余的孔。
待全部加入完畢時，蓋上蓋子，放入培養箱。（細胞的均勻鋪被是本實驗成功的大前提）。
其次，是細胞的處理。一般給CCK-8有兩種方式：第一種是直接每孔加入10微升的CCK8原液；另一種則是配置含10%的CCK-8培養基，以換液的形式加入孔板。
第一種方式的弊端在于10微升的CCK-8量比較少，可能因沾在孔壁導致誤差的出現。
第二種方式可以避免上述情況的發生，但操作過程中仍需注意10%的CCK-8培養基需要現配現用；其次打入100微升的CCK-8時沿著孔壁將槍頭伸入液體緩緩打出，再移出槍頭。
期間可能會產生小氣泡，需要用無菌針頭燒紅插入氣泡，消除氣泡。（氣泡會影響OD值，因此應該盡量消除）。
最后，就是反應時間問題。將孔板放入培養箱培養1-4小時，引細胞種類和數量的差異，可能形成的Formazan的量不一樣。因此需要把握好培養的時間。
我的經驗是：在培養2h后，取出孔板，每孔抽取90微升加入至新孔板，進行第一次檢測，看看顯色的深淺程度（仍然需要注意氣泡，若有氣泡需要待氣泡消除后再進行檢測）
若顯色較淺，則可除去舊培養基，加入新培養基，再培養1-4小時，重新加CCK-8步驟，然后將其放入培養箱培養4小時，再進行檢測（其最佳反應時間為0.5、1、2小時）
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者
深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。
可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務。
- 下一篇：ELISA實驗經驗總結
- 上一篇：細胞凍存的實驗步驟＆注意事項
銷售熱線
