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馬松染色的實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間： 2024-04-01　　點(diǎn)擊次數(shù)： 2802次

馬松（Masson）染色是一種用于可視化組織纖維和炎性因子的染色方法。該技術(shù)充分利用了不同組織成分對(duì)陰離子燃料滲透性的差異。此法多用于觀察病變組織中纖維結(jié)締組織的增生和分布,纖維素腫瘤與肌源性腫瘤的鑒別，在肌肉疾病和心血管疾病的診斷中具有重要意義。

一、原理：
Masson染色，又成為馬松染色，是結(jié)締組織染色領(lǐng)域中經(jīng)典的一種技術(shù)方法，專注于膠原纖維的染色。該方法被廣泛應(yīng)用于組織學(xué)研究中，其主要目的是對(duì)胞核進(jìn)行染色，并能夠有選擇地展示膠原纖維和肌纖維。

Masson染色的原理與陰離子染料分子的大小以及對(duì)組織的滲透性密切相關(guān)：分子的大小由其分子量決定，小分子量的染料能夠輕松穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織，而大分子量則僅能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松、滲透性較高的組織。然而，由于淡綠或苯胺藍(lán)的分子量較大，因此Masson染色后，肌纖維呈現(xiàn)紅色，而膠原纖維呈綠色或藍(lán)色，主要用于區(qū)分這兩者。

對(duì)石蠟包埋的大鼠氣道切片進(jìn)行Masson染色
材料準(zhǔn)備：4%甲醛固定液、二甲苯（AR級(jí)）、無(wú)水乙醇（AR級(jí)）、蘇木素染色液、鹽酸(AR級(jí)）、麗春紅、酸性品紅、磷鉬酸、苯胺藍(lán)、乙酸、中性樹膠

二、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、石蠟切片脫蠟至水：將切片依次置于二甲苯Ⅰ中浸泡20分鐘，二甲苯Ⅱ中浸泡20分鐘，無(wú)水乙醇Ⅰ中浸泡10分鐘，無(wú)水乙醇Ⅱ中浸泡10分鐘，95%酒精中浸泡5分鐘，90%酒精中浸泡5分鐘，80%酒精中浸泡5分鐘，70%酒精中浸泡5分鐘，最后進(jìn)行蒸餾水洗。

2、對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行蘇鐵蘇木素染色：將切片浸入蘇鐵蘇木素染液中染色3-8分鐘，然后進(jìn)行流水沖洗。

3、利用麗春紅-酸性品紅染色：將切片置于麗春紅-酸性品紅染液中進(jìn)行染色5分鐘，然后使用0.2%冰醋酸進(jìn)行沖洗。

4、磷鉬酸分化：將切片放入磷鉬酸中進(jìn)行分化數(shù)秒，然后進(jìn)行水洗。

5、苯胺藍(lán)染色：將切片放入苯胺藍(lán)染液中進(jìn)行染色5分鐘，然后使用0.2%冰醋酸進(jìn)行沖洗。

6、快速脫水和透明化：按照以下步驟進(jìn)行脫水和透明化：依次將切片放入95%酒精Ⅰ中浸泡5分鐘，95%酒精Ⅱ中浸泡5分鐘，無(wú)水乙醇Ⅰ中浸泡5分鐘，無(wú)水乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘，二甲苯Ⅰ中浸泡5分鐘，二甲苯Ⅱ中浸泡5分鐘，然后將切片從二甲苯中取出稍事晾干，最后使用中性樹膠封片。

7、鏡檢，并進(jìn)行圖像采集和分析。

三、Masson染色實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、嚴(yán)格掌握染色步驟，特別是在每個(gè)步驟之間進(jìn)行充分洗滌是至關(guān)重要的。這有助于防止前一步驟的染料殘留對(duì)下一步染色產(chǎn)生影響。

2、組織的有效固定在染色過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。根據(jù)使用不同固定液的情況，可以靈活調(diào)整染色時(shí)間，以實(shí)現(xiàn)最佳染色效果。

3、使用0.2%冰醋酸水溶液進(jìn)行洗滌，有助于產(chǎn)生清晰鮮艷的色調(diào)。

4、注意避免過度干燥：在染色過程結(jié)束后，務(wù)必防止樣本的過度干燥，以避免產(chǎn)生偽影。

5、苯胺藍(lán)和麗春紅要充分溶解然后過濾使用，不過濾的染液里面雜質(zhì)過多，會(huì)阻礙染液和組織的結(jié)合緊密程度。

6、磷鉬酸水溶液對(duì)麗春紅和酸性復(fù)紅具有分化作用。在分化過程中，通過鏡下仔細(xì)控制，可以觀察到肌纖維和纖維素呈現(xiàn)紅色，而膠原纖維呈淡粉紅色即可。

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