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細胞爬片免疫組化染色實驗步驟

發(fā)布時間： 2024-01-22　　點擊次數(shù)： 1384次

原理：
免疫組織化學技術(shù)：檢測組織原位表達的肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細胞因子、受體、表面抗原等抗原性物質(zhì)。

（一）組織和細胞標本的準備
組織標本的取材-取材新鮮，固定及時，形態(tài)完好。

細胞標本的準備
（1）活體細胞標本：印片法、穿刺吸取法、沉淀法

（2）培養(yǎng)細胞標本：
① 細胞涂片: 將細胞制成懸液（10^6）涂在涂有切片粘合劑的載玻片上，晾干后固定（細胞甩片）。
②細胞爬片: 將細胞直接培養(yǎng)在蓋玻片上將細胞直接培養(yǎng)在6孔或9孔板上。
3.固定
(1)保持形態(tài)：終止和抑制外源性和內(nèi)源性酶活性，防止組織細胞的死后變化，防止自溶和腐敗，保持組織細胞的固有形態(tài)。
(2)保存抗原：使細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖和酶等各種抗原成份轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)和定位與生活時相仿。
（3）硬化作用：固定劑兼有硬化作用、使組織硬化、增加組織硬度、便于制片。
（4）便于觀察：使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學差異，以便染色后易于鑒別和觀察;經(jīng)過固定的組織能對染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辨認。
注意事項：
①防止脫片：玻片預處理(多聚賴氨酸)、溫和操作。
②力求保持組織新鮮，勿使其干燥，盡快固定處理。
③組織塊不易過大過厚，必須小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm，尤其是組織塊厚度須保持在0.3cm 以內(nèi)。
④固定劑必須有足夠的量，在體積上一般大于組織20倍。
⑤組織固定后，應充分水洗，去除固定劑，以減少固定劑造成的人為假像。
（三）細胞爬片的免疫組化染色
1. 取出細胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20 ～30 分鐘。
2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。
3. 打孔液浸泡 5 分鐘。
4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。
5. 后接前述實驗步驟的第 6 步（正常血清封閉）。
注：第 3、4 步僅用于檢測細胞內(nèi)抗原，檢測細胞膜抗原時不用。
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