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PCR 產(chǎn)物純化

發(fā)布時(shí)間： 2023-04-21　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1615次

材料與儀器
TE 或去離子水 PCR 產(chǎn)物
離心機(jī)和轉(zhuǎn)子 PCR 濾件微量離心管
步驟
一、材料

1. 緩沖液和溶液

TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水

2. 核酸和寡核苷酸

待測(cè)序的 PCR 產(chǎn)物

3. 離心機(jī)和轉(zhuǎn)子

帶有固定傾角轉(zhuǎn)子的小型離心機(jī)，如 Eppemlorf5415C

4. 特殊設(shè)備

AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 或者相當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品，微董離心管或接收管

二、方法

1. 對(duì)每一個(gè)待純化的 PCR 產(chǎn)物，都在接收管中放置一個(gè)濾件，濾件的儲(chǔ)液面向上

儲(chǔ)液池中加入 400ul 去離子水或 TE，注意加樣時(shí)不要觸及膜。加入 100ulPCR 產(chǎn)物，避免帶進(jìn)礦物油。如果 PCR 產(chǎn)物不足 100ul, 用去離子水或 TE 補(bǔ)足，蓋上蓋子。

2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉(zhuǎn)子的離心機(jī)，l000 g 離心 15 min(例如，Eppendorf5415C 離心機(jī)上 3300r/min)。注意蓋子和管的結(jié)合部朝向轉(zhuǎn)子的中央。

3. 移去濾件，將其放入一干凈的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，濾件可以一直

存到樣品分析結(jié)束）。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 TE，注意不要觸及膜，然后將濾件反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，放回到干凈的收集管中，使帶有液體的一面朝下。

4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。

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