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細(xì)胞傷口愈合

發(fā)布時(shí)間： 2023-01-16　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1576次

原理
在單層培養(yǎng)細(xì)胞間制作劃痕以產(chǎn)生愈傷區(qū)域，然后監(jiān)控該傷口周圍細(xì)胞的向劃痕遷移的現(xiàn)象，即傷口愈合。改變細(xì)胞遷移和/或生長(zhǎng)的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量，適用于自動(dòng)化系統(tǒng)高通量篩選。
材料與儀器
人MDA-MB-231細(xì)胞
DMEM培養(yǎng)基胎牛血清 PBS 戊二醛乙醇結(jié)晶紫
24孔培養(yǎng)板槍頭細(xì)胞培養(yǎng)儀
步驟
1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長(zhǎng)24小時(shí)后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。

3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號(hào)的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。

4.在垂直與第一條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。

5.劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細(xì)胞。

6.每孔添加新鮮培養(yǎng)基。

7.（培養(yǎng)基中含有某些成分，如抑制/促進(jìn)細(xì)胞遷移和/或增殖的化學(xué)物質(zhì)）

8.細(xì)胞生長(zhǎng)48小時(shí)（或根據(jù)時(shí)間需要）。

9. 1xPBS清洗細(xì)胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。

10. 1%的結(jié)晶紫（2%乙醇溶解）染色30分鐘。
注意事項(xiàng)
為了降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可變性，建議每孔選擇多個(gè)視野觀察，每組做多個(gè)重復(fù)。
常見問題
gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測(cè)量，為了降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可變性，建議每孔選擇多個(gè)視野觀察，每組做多個(gè)重復(fù)。

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