亚洲欧美自拍另类日韩,一区二区三区av波多野结衣,9草在线

技術(shù)文章ARTICLE

您當(dāng)前的位置：首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間： 2023-01-05　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1808次

原理
傳統(tǒng)上的細(xì)胞凍存（甘油/二甲基亞砜做保護(hù)劑）講求的是：慢凍速溶。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入的甘油或二甲基亞砜（DMSO），這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。

用途
細(xì)胞保種
材料與儀器
【實(shí)驗(yàn)材料】細(xì)胞、DMSO、0.25% Trypsin-EDTA（或細(xì)胞刮刀）、100 X雙抗、PBS、胎牛血清、DMEM 完-全培養(yǎng)基、75% 乙醇、胰酶、異丙醇；
【儀器與用品】?jī)龃婀堋?7度恒溫水浴鍋、培養(yǎng)皿（6 cm）、細(xì)胞凍存盒（已添加異丙醇）或凍存泡沫盒、記號(hào)筆、-80度冰箱、倒置相差顯微鏡、凍存管、37度恒溫水浴鍋、培養(yǎng)皿（6cm）、液氮罐、離心機(jī)、細(xì)胞房專(zhuān)用超凈臺(tái)、移液槍及移液槍頭（無(wú)菌或滅菌后烘干）、一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板、細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀、培養(yǎng)箱、移液管。
步驟
1. 預(yù)先配制凍存液：按正常培養(yǎng)基：DMSO =9:1比列配制凍存液;
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用胰蛋白酶把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)，離心1000 rpm，5 min;
3. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/mL～1×107/mL;
4. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml;
5. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間、細(xì)胞代數(shù)及操作者;
6. 往凍存盒中加入異丙醇（在負(fù)八十冰箱中能以1℃/min的速度下降）放入負(fù)八十冰箱即可，建議12小時(shí)以上，一般可在負(fù)八十中保存半年至一年，長(zhǎng)期保存要轉(zhuǎn)移至液氮中；商用凍存液可以直接凍存管放負(fù)八十冰箱。

注意事項(xiàng)
1、液氮凍存不建議用國(guó)產(chǎn)凍存管，復(fù)蘇時(shí)容易爆管；
2、消化細(xì)胞時(shí)，不能過(guò)度消化；
3、DMSO溶于DMEM培養(yǎng)基會(huì)放熱，應(yīng)提前5-10分鐘配置凍存液。用凍存盒時(shí)避免異丙醇將標(biāo)記擦掉；
4、二甲基亞砜能穿透許多合成的或天然的膜，包括皮膚和橡膠手套。因此，應(yīng)謹(jǐn)慎處理。將凍存管放入液氮時(shí)，必須使用保護(hù)性手套和面罩。
常見(jiàn)問(wèn)題
1、細(xì)胞消化過(guò)度，導(dǎo)致復(fù)蘇時(shí)細(xì)胞狀態(tài)不好；
2、負(fù)八十冰箱中長(zhǎng)期保存細(xì)胞效果不好，應(yīng)及時(shí)將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中；
3、國(guó)產(chǎn)凍存管在液氮中容易漏液氮，導(dǎo)致復(fù)蘇時(shí)曝管，所以放液氮中盡量使用質(zhì)量較好的凍存管。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

下一篇：單層細(xì)胞在細(xì)胞瓶中的接種

上一篇：免疫熒光抗體法

產(chǎn)品中心 Products

細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)