国产欧美日韩综合一区,人妻丰满熟妇ⅴ无码区a片 ,丰满五十六十老熟女hd

技術文章ARTICLE

您當前的位置：首頁 > 技術文章 > 怎么使用GSIS方法檢測細胞胰島素分泌

怎么使用GSIS方法檢測細胞胰島素分泌

發(fā)布時間： 2023-01-04　　點擊次數： 2313次

Min6細胞是這次贈送活動中很多客戶選擇的細胞，一共送出去有50多株，隨之而來的就是問胰島素的檢測，很多客戶檢測出來只有低表達。

Min6細胞培養(yǎng)需要注意三點：
1.細胞易聚團，消化的時間表面上看會非常短暫，大約30秒會全部脫落，脫落后請延長消化時間到2分鐘后，再中和，細胞后期聚團會減少。
2.活細胞運輸的時候會漂浮，請收集培養(yǎng)基離心，離心后重新鋪板以完-全培養(yǎng)基剛沒過細胞為準，完-全培養(yǎng)基加太多會導致細胞浮力過大，貼壁不上。
3.培養(yǎng)基請一定要加0.05mm的β-Mer

以下是我們檢測使用的buffer和protocol，步驟不能少，一步一步的來。

Buffer的配制：
NaCl 114mM, KCl 4.7mM, KH2PO4 1.2mM, MgSO4-7H2O 1.16mM, NaHCO3 25.5mM, CaCl2 2.5mM, HEPES 20mM, 0.2% BSA --> pH 7.2-7.5（一定要控制PH值范圍）

操作步驟：以2mM glucose 和25mM glucose 為例:
細胞鋪板每孔大約2000個細胞，鋪板前三天左右脫抗生素采用滅活血清+β-Mer培養(yǎng)1640+10%FBS(滅活）+0.05mm β-Mer；在96孔板中培養(yǎng)24小時，然后將培養(yǎng)基改為含2mM葡萄糖培養(yǎng)基過夜。
1.去除培養(yǎng)基，1 x PBS清洗細胞5分鐘
2.基礎緩沖液(2mM 葡萄糖) ，2小時孵育 -- > 培養(yǎng)
3.去除上清液 -- > 1 x pbs 清洗，請注意不要觸碰底面
4.葡萄糖刺激(2mM ) ，1小時孵育
5.收獲上清液 -- > 1 x pbs 清洗，請注意不要觸碰底面
6.葡萄糖刺激(2mM ) ，1小時孵育；
7.收獲上清液 -- > 1 x pbs 清洗，請注意不要觸碰底面
8.上清液取樣 -- > 1500轉，5 min，4度；
9.細胞裂解---- > 蛋白質定量---- > 上機

以下為檢測結果：
注意點：
為了確保細胞分泌的胰島素混合到上清液樣本中，可以在培養(yǎng)期間在100-300轉的平板振蕩器上輕輕攪動細胞。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。

下一篇：收到活細胞怎么處理？

上一篇：小鼠MSC細胞的提取操作

產品中心 Products

怎么使用GSIS方法檢測細胞胰島素分泌