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染料排斥法測定細胞生存力實驗
發布時間： 2022-12-13 點擊次數： 1992次原理
萘黑、臺盼藍以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透過活細胞。
將細胞懸液與染料混勻，在低倍顯微鏡下檢査。材料與儀器
胰蛋白酶
巴斯德吸管 顯微鏡 手執計數器 生存力染料 血細胞計數板步驟
材料
無菌
受試細胞，如胰蛋白酶消化的貼壁細胞、融化冷凍的細胞或原代離散的細胞
合適的生長液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml
非滅菌
血細胞計數板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺盼藍或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
顯微鏡
手執計數器
操作步驟
1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸，制備高濃度的細胞懸液（約1X106 個/ml)。
2. 取一塊干凈的血細胞計數板，將蓋玻片間定在適當位置上。
3 . 將一滴細胞懸液和一滴（臺盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻。
4 . 加至血細胞計數板的計數室中。
5 . 靜置1～2min (但不要放置很久，否則活細胞會受到損傷而吸收染料）。
6 . 將計數板置于顯微鏡下，選擇10X 物鏡，利用網格線聚焦。
7 . 計數細胞總數以及著色細胞數。
8 .清洗血細胞計數板，放人盒內。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
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