99热免费,精品久久久久久天美传媒,亚洲天堂首页

技術(shù)文章ARTICLE

您當(dāng)前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法

發(fā)布時(shí)間： 2022-10-20　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1983次

材料與儀器

凍存 HeLa S3 細(xì)胞
70% 乙醇 * MEM-10 胰酶／EDTA
旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-5 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶 C02 培養(yǎng)箱 Sorvall H-6000A 轉(zhuǎn)子 100 ml 或 200 ml 通氣旋轉(zhuǎn)瓶和帶濾膜的瓶蓋

步驟

1. 將含有凍存 HeLa S3 細(xì)胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解凍。
2. 用 70% 乙醇對安瓿的頂端進(jìn)行消毒，打開安瓿，用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有 5 ml * MEM-10 培養(yǎng)基的 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，放入 5% CO2 加濕培養(yǎng)箱中 37℃ 培養(yǎng)過夜。
3. 將培養(yǎng)基吸出，用 0.5 ml 37℃ 的胰酶/EDTA 覆蓋細(xì)胞，消化 30～40 s。
4. 加入 10 ml 旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-5，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 50 ml 的離心管中。室溫 1800 g 離心 5 min，棄上清。
5. 將細(xì)胞沉淀懸浮在 5 ml 的旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-5 中，上下吹打，將細(xì)胞團(tuán)打散。
6. 在 100 ml 或 200 ml 通氣旋轉(zhuǎn)瓶中加入 50 ml 旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-5，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到瓶中。
7. 取出 1 ml 細(xì)胞懸液，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器（附錄 3F) 進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。加入適量的旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-5，使細(xì)胞密度為（3～4）× 105 細(xì)胞/ml。將細(xì)胞放入無 CO2 培養(yǎng)箱，37℃ 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。
8. 隨后的兩天讓細(xì)胞繼續(xù)生長，并且每天對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，加入適量的旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-5 以維持（3～4）×105 細(xì)胞/ml 的細(xì)胞密度。
9. 取 1 ml 的細(xì)胞懸液，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行監(jiān)測。
10. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到（4～5）×105 細(xì)胞/ml 時(shí)，隔天或每天用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至 1.5×105 或 2.5×105 細(xì)胞/ml。
11. 分別將裝有 50 ml 或 100 ml 細(xì)胞懸液的 100 ml 或 200 ml 通氣旋轉(zhuǎn)瓶放入 37℃ 無 CO2 培養(yǎng)箱旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。每天或隔天傳代。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)

下一篇：正常大鼠原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)方法

上一篇：如何提高細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率？

產(chǎn)品中心 Products

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法

材料與儀器

步驟