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原位裂解細胞的CAT分析法

發(fā)布時間： 2021-12-15　　點擊次數(shù)： 1780次

材料與儀器
轉(zhuǎn)染細胞
Triton裂解液
培養(yǎng)皿培養(yǎng)箱
步驟
1. 60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達質(zhì)粒的細胞，用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5 min。

2. 吸去低滲緩沖液，加入400 μl Triton裂解液。用橡膠刮子將細胞刮離培養(yǎng)血，用1 000 μl 移液器將裂解物移入1.5 ml 微量離心管中。

3. 微量離心1 min 除去細胞核，不可溶性蛋白。將上清轉(zhuǎn)入一個干凈的微量離心管中，進行CAT活性分析。

同實驗其他方法
CAT活性的層析分析法
1. 100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達質(zhì)粒的貼壁細胞，用PBS洗兩次，每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細胞置于冰浴5 min。 2. 用橡膠
CAT活性的相-抽提分析法
一、來源于哺乳動物細胞 1. 按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細胞方法來收集細胞，則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2
人生長激素的放射免疫分析法
1. 取轉(zhuǎn)染了hGH表達質(zhì)粒的哺乳動物細胞的培養(yǎng)液100~500 μl。 2. 加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-
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