-
上海中科院藥物所高效轉(zhuǎn)染BV-2小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的操作方法
發(fā)布時(shí)間： 2021-11-12 點(diǎn)擊次數(shù)： 3358次上海中科院藥物所,使用zeta life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑成功轉(zhuǎn)染BV-2小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染條件和操作方法分享如下：
一、轉(zhuǎn)染條件：
細(xì)胞密度：60左右
質(zhì)粒DNA濃度：700ng/ul
質(zhì)粒DNA大小：6500bp
培養(yǎng)板：24孔板
轉(zhuǎn)染試劑用量：電訊
質(zhì)粒DNA用量：電訊
轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)
二、操作方法：
提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。
分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實(shí)驗(yàn)耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測(cè)
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類(lèi)-實(shí)驗(yàn)耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測(cè)系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
-
類(lèi)器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫(kù)
-
蛋白研究系列
-
修飾檢測(cè)試劑盒
