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詳解miRNA的誕生之旅

發(fā)布時間： 2021-09-01　　點擊次數(shù)： 3408次

miRNA 是由內(nèi)源性發(fā)卡結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物衍生而來的一種長為 19-25nt 左右的單鏈 RNA。
第一， miRNA基因最先被RNA polymerase II轉(zhuǎn)錄生成5'蓋帽和3‘加尾的初級轉(zhuǎn)錄體，稱為pri-miRNA，長度約為 300-1000bp。
第二，經(jīng) RNase III enzyme Drosha 和 DGCR8 剪切生成由 70 個核苷酸組成的不*的發(fā)卡結(jié)構(gòu)，并且在 3‘端末端具有 2 個核苷的懸垂，此末端則為成熟的 miRNA 的末端，上面有一些凸起和環(huán)狀結(jié)構(gòu)，稱為 pre-miRNA。DGCR8 是屬于 Pasha 蛋白家族的。該莖環(huán)結(jié)構(gòu)可以在 miRBase 數(shù)據(jù)庫中查詢到。
第三，該莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體 miRNA 被核內(nèi)轉(zhuǎn)運蛋白 Exportin5 捕獲到，并且通過細胞核孔復合體被運輸?shù)郊毎狻?/p>
第四，運輸?shù)郊毎獾?pre-miRNA 很快被 Dicer 酶與 GTP 酶 Ran 和 TRBP 等組成的復合物識別，并且開始消化該 pre-miRNA，切掉其環(huán)狀結(jié)構(gòu)，直至其變成不穩(wěn)定的雙鏈 RNA，也稱為 dsRNA 或者是 miRNA/miRNA*。
第五，dsRNA 的不穩(wěn)定可以被 AGO 蛋白以及 RNA 解旋酶復合物解鏈成為兩個單鏈，并且其中一條被降解，另一條則成為 20-23nt 的 mature microRNA，成熟的 miRNA 序列可在 miRBase 數(shù)據(jù)庫中查詢到，如視頻仁中顯示 dsRNA 變?yōu)槌墒?miRNA 的過程。

miRNA 成熟過程中的關(guān)鍵性酶和蛋白
RNA polymerase II：一般認為 miRNA 基因由 RNA polymerase II 轉(zhuǎn)錄而來。可將 miRNA 基因轉(zhuǎn)錄成 5'端蓋帽 m7G 和 3‘端加尾 polyA 結(jié)構(gòu)。
Drosha：Drosha 蛋白為 RNase III enzyme 家族中的成員之一，主要作用就是剪切 Pri-miRNA 成為具有 3‘ 端 2nt 懸垂的 pre-miRNA。
DGCR8：是第一個被鑒定出來的參與了體內(nèi) miRNA 加工過程的 Pasha 蛋白，參與了 Drosha 蛋白對底物的識別。 Exportin5：為核轉(zhuǎn)運受體家族的一個成員，其作用過程通過核孔復合體進行。Exp5 與 RanGTP 以及 Pre-miRNA 形成一個三聚體，通過細胞核孔運輸?shù)桨麧{，Ran-GTP 則變?yōu)?Ran-GDP，從而釋放出 Pre-miRNA。Ran-GTP 屬于核轉(zhuǎn)運受體家族的輔助因子。
Dicer 酶：屬于 RNase 超家族的第三類酶，經(jīng)典的 DCR 結(jié)構(gòu)域包括 N 端的 DExH RNA 解旋酶 /ATP 酶結(jié)構(gòu)域，PAZ 結(jié)構(gòu)域和兩個相鄰的 RNaseIII 樣結(jié)構(gòu)域以及一個 dsRNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
Dicer 酶是成熟的 miRNA 產(chǎn)生所必須的，可以剪切 pre-miRNA5'端臂，也可以剪切 3‘ 端臂，或者同時剪切兩條臂。

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