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上圖！教你秒懂重組 DNA 技術(shù)常用工具酶！

發(fā)布時(shí)間： 2021-08-25　　點(diǎn)擊次數(shù)： 8773次

1 分子剪刀——限制性內(nèi)切酶：
作用：識(shí)別特異序列，切割 DNA

限制酶的命名是根據(jù)細(xì)菌種類而定，以 EcoRI 為例：

2 膠水——DNA 連接酶
作用：跟限制性內(nèi)切酶對(duì)著干，催化 DNA 中相鄰核苷酸間形成磷酸二酯鍵，使 DNA 切口縫合，連接 DNA 片段。
無(wú)論是雙股或是單股 DNA 的黏合，DNA黏合酶都可以借由形成磷酸雙脂鍵將 DNA 在 3'端的尾端與 5'端的前端連在一起。

3 DNA 聚合酶
就像玩拼圖能手，DNA 聚合酶用于 DNA 復(fù)制，連接兩條 DNA 單鏈形成一條 DNA 雙鏈，作用于堿基對(duì)間的氫鍵。
DNA 聚合酶主要應(yīng)用于： a.合成雙鏈 cDNA 中第二條鏈;b.缺口平移制做探針;c.DNA 序列分析;d.填補(bǔ) 3'末端。

4 反轉(zhuǎn)錄酶
作用：a.合成 cDNA;b.替代 DNA 聚合酶Ⅰ進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA 序列分析
反轉(zhuǎn)錄酶的基本特性：以 RNA 為模板聚合 cDNA 鏈以及雙向外切 DNA-RNA 雜合鏈中的 RNA 鏈。
主要用于熒光定量 PCR 和 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建等。

5 多聚核苷酸激酶
作用：催化 DNA 5'羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針
它是由 T 偶數(shù)噬菌體所感染的大腸桿菌分離出來(lái)的酶，能催化 ATP 的 γ-磷酸轉(zhuǎn)移到 DNA 或 RNA 的 5'-OH 末端生成 ADP 的反應(yīng)。
因?yàn)榇嗣傅拇呋磻?yīng)特異性很高，可用 32P 標(biāo)記的 ATP 特異地標(biāo)記多核苷酸的 5'末端。廣泛應(yīng)用于多核苷酸的鏈長(zhǎng)的測(cè)定和 5'末端核苷酸排列的確定等核酸結(jié)構(gòu)的研究。

6 堿性磷酸酶：切除 DNA5′末端磷酸基
堿性磷酸酯酶的作用是從 DNA 或 RNA 的三磷酸核苷酸上除去 5'磷酸根殘基。可用于防止 DNA 片段自身連接，或標(biāo)記（5'端）前除 DNA 或 RNA 5' 磷酸。

7 末端轉(zhuǎn)移酶：在 3'羥基末端進(jìn)行同系多聚核苷酸加尾。
末端轉(zhuǎn)移酶的作用是將脫氧核糖核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵加到 DNA 分子的 3'-OH 末端。主要用于拼接人工接頭或在 3'端進(jìn)行引物標(biāo)記的時(shí)候。

8 DNA 水解酶
DNA 在水解酶的作用下，可以得到四種不同的核苷酸，即腺嘌呤脫氧核苷酸【A】，鳥嘌呤脫氧核苷酸【G】，胞嘧啶脫氧核苷酸【C】，胸腺嘧啶脫氧核苷酸【T】。

9 RNA 酶：切割 RNA
一類催化 RNA 降解為小片段的核酸酶。
RNase 酶非常穩(wěn)定，是導(dǎo)致 RNA 降解最主要的物質(zhì)。

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