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了解和認(rèn)識(shí)胎牛血清，特殊加工工藝血清，您知道幾種？
發(fā)布時(shí)間： 2021-08-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 11833次血清作用原理：
正因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物，含有細(xì)胞培養(yǎng)中所需的各種營(yíng)養(yǎng)（血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等），所以奠定了血清是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中最基本普遍試劑的基礎(chǔ)。血清通常用作細(xì)胞生長(zhǎng)的添加物，擁有多種功能和用途，如：富含大分子蛋白，低分子量的營(yíng)養(yǎng)素，作為氨基酸、碳水化合物、維生素的額外來(lái)源；提高介質(zhì)的緩沖能力；可結(jié)合或中和有毒成分；減少細(xì)胞氧化應(yīng)激，減少細(xì)胞凋亡；提供促進(jìn)生長(zhǎng)的因子，有助細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境。
▽ 成分表
血清通過(guò)牛齡進(jìn)行分類(lèi)，可大致分為：
胎牛血清（Foetal Bovine Serum，簡(jiǎn)稱(chēng)FBS）、國(guó)產(chǎn)胎牛血清（并無(wú)明確定義，但通常用此命名）、新生牛血清（Newborn Calf Serum，簡(jiǎn)稱(chēng)NBCS，或稱(chēng)小牛血清）、成年牛血清（Adult Bovine Serum，簡(jiǎn)稱(chēng)ABS）。
不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。
▽ 比較
一、透析胎牛血清
常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)需要添加血清來(lái)維持細(xì)胞的增殖能力，盡管血清可以滿(mǎn)足一般細(xì)胞培養(yǎng)需求，但在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)記特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中，仍需要去除某些特定的成分，常用的去除方法有透析。透析是將血清循環(huán)通過(guò)中空纖維，并在血清中補(bǔ)充生理鹽水以維持滲透壓，移除分子量小于10,000Da的小分子，如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白等。 因此透析胎牛血清主要用于關(guān)注小分子濃度的特殊研究，包括：研究蛋白質(zhì)組學(xué)，同位素標(biāo)記、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和報(bào)告基因分析、報(bào)告基因細(xì)胞系的篩選等。 ①細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)（簡(jiǎn)稱(chēng)SILAC）
這是一項(xiàng)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，全稱(chēng)為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture （SILAC）。它將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì)，一般培養(yǎng)5-6代，細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析，即可比較經(jīng)過(guò)不同處理的細(xì)胞，其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細(xì)胞與病理狀態(tài)細(xì)胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細(xì)胞蛋白中的氨基酸均為標(biāo)記氨基酸（常采用賴(lài)氨酸或精氨酸）。
②工程細(xì)胞株的篩選
以常見(jiàn)的工程細(xì)胞株CHO-DFGRˉ為例，該細(xì)胞自身缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR），必須在添加了次黃（嘌）漂呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆。通過(guò)甲氨蝶呤（MTX）進(jìn)一步篩選，可進(jìn)一步得到能表達(dá)大量目的蛋白的細(xì)胞克隆。這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃（嘌）漂呤和胸腺嘧啶等，也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分，參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。
研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對(duì)某種類(lèi)型細(xì)胞增殖、分化的影響。這時(shí)也需要用透析胎牛血清，以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。 二、碳吸附胎牛血清
在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)記特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中，需要去除某些特定的背景成分，常用的去除方法有碳吸附，使用活性碳和右旋糖苷去除血清中的激素。 活性炭能夠結(jié)合脂溶性分子，通過(guò)碳吸附可降低血清中許多激素及生長(zhǎng)因子的濃度，如雌二醇、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、孕酮、B類(lèi)維生素、睪酮及T3、T4、前列腺素等。該血清適用于上述一些分子可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于那些需要這些分子的細(xì)胞培養(yǎng)，也可能降低細(xì)胞生長(zhǎng)性能。
碳吸附胎牛血清用于體外培養(yǎng)，去除背景值以驗(yàn)證激素的作用效果，研究包括醇類(lèi)受體連接，細(xì)胞受體類(lèi)固醇調(diào)節(jié)，各種組織激素分泌和甲狀腺激素功能。
適用于：培養(yǎng)干細(xì)胞、原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、人類(lèi)癌細(xì)胞、人類(lèi)骨髓細(xì)胞、白血病細(xì)胞、人類(lèi)胚肺成纖維細(xì)胞、人類(lèi)腦神經(jīng)細(xì)胞和瘤細(xì)胞等細(xì)胞。
三、去外泌體胎牛血清
外泌體由分泌性細(xì)胞分泌，存在于所有的生物體液中，包括血液、尿液、唾液、乳汁和腦脊液中。它們隨后被其他細(xì)胞吸收并發(fā)揮生物活性。 
△外泌體
胎牛血清中含有大量的外泌體，但在外泌體研究中，如果仍然使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，并通過(guò)收集上清液來(lái)提取外泌體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，那么胎牛血清中本身的牛源外泌體將會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)分析造成極大的干擾。去外泌體血清是將由無(wú)菌采集的健康胎牛血清經(jīng)過(guò)過(guò)濾，去除≥99%的胎牛血清內(nèi)源外泌體，還可使細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)與未處理的胎牛血清具有相同的增殖速率和形態(tài)。
因此，去外泌體血清主要用于細(xì)胞體外的增殖培養(yǎng)，收獲目標(biāo)細(xì)胞的外泌體。 四、四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)胎牛血清
普通胎牛血清中一般會(huì)含有四環(huán)素（Tet），當(dāng)使用非常敏感的Tet-誘導(dǎo)的基因表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，研究人員往往會(huì)遇到非預(yù)期的基因表達(dá)的問(wèn)題，為了確保精確地基因表達(dá)，建議使用四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)胎牛血清，應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)(Tet-on, Tet-off)，以及其它對(duì)四環(huán)素敏感的實(shí)驗(yàn)中。 五、低IgG胎牛血清
IgG是胎牛血清中發(fā)現(xiàn)的最常見(jiàn)的抗體，低IgG血清主要通過(guò)A-Sepharose處理，使血清能夠保留原有的生物活性，同時(shí)降低血清的IgG含量，低于5μg/ml。低IgG胎牛血清適用于培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。 因此，低IgG胎牛血清有利于單克隆抗體的純化，用于研究抗體和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。 六、去脂胎牛血清
去脂胎牛血清通過(guò)固體基質(zhì)脫脂作用去除內(nèi)源性脂類(lèi)、甘油三酯和膽固醇，含量?jī)H為標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的1/3。 去脂胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中用量較多，其含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成分，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。
①提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
②提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
③有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱源質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。
④是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基上所需因子來(lái)源。
⑤起酸堿緩沖液作用。
⑥提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
去脂胎牛血清可用于蛋白激酶CK2-α’與腺樣囊性癌肺轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究：
①蛋白激酶是酶類(lèi)這個(gè)家族中最龐大的一員，被用來(lái)完成蛋白磷酸化作用的催化，這是控制細(xì)胞生命活動(dòng)中最通常的機(jī)制。其中*有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2。蛋白激酶CK2（protein kinase CK2, PKCK2），過(guò)去曾經(jīng)被稱(chēng)為酪蛋白激酶-2或Ⅱ（cascin kinase2 or Ⅱ）。它是由兩個(gè)催化亞基（aa’）和兩個(gè)調(diào)節(jié)亞基（ββ）構(gòu)成的不均一四聚體。
②蛋白激酶CK2是由兩個(gè)分別為42—44KDa和38KDa的aa’ββ型異四聚體結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)很穩(wěn)定,在體外只有在變性的條件下才能被解離。除了細(xì)胞基質(zhì),一些病毒蛋白也被CK2所磷酸化。蛋白激酶CK2在轉(zhuǎn)錄、信號(hào)、增殖，并且在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的各細(xì)胞步驟中發(fā)揮作用。 七、熱滅活系列血清
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。 實(shí)驗(yàn)顯示，熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是非必需的，對(duì)于非必須的細(xì)胞來(lái)說(shuō)血清滅活對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)只有微小甚至無(wú)任何作用，還可能造成生長(zhǎng)速率降低，沉淀物還會(huì)顯著增多，不利于細(xì)胞觀(guān)察。因此，若非必須，不需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。 如若需要使用熱滅活血清，可通過(guò)提高血清溫度到56℃，并且保持該溫度30分鐘完成。建議加放空白對(duì)照（同體積水）使用溫度計(jì)測(cè)溫，以測(cè)得溫度為56℃時(shí)為計(jì)時(shí)起始點(diǎn)，加熱中可不時(shí)輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。 ☆ 血清的使用方法
血清從冰凍區(qū)中取出后（切勿直接將血清從-20℃置入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀），放置于2℃～8℃中使之融化，解凍過(guò)程中間歇地輕輕搖晃均勻，待全部溶解后再分裝或直接使用。*融解的血清從4℃拿出，按要求比例（5%-20%）加基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置成*培養(yǎng)基，建議使用不完時(shí)，置于4℃冰箱存放并于1-2周內(nèi)用完。
☆ 使用血清時(shí)的注意事項(xiàng)
血清沉淀的物質(zhì)主要有：纖維蛋白（絮狀沉淀），脂蛋白，冷凝集素，玻連蛋白，胎球蛋白，磷酸鈣（顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀），膽固醇等。
哪些原因容易導(dǎo)致血清沉淀：
1、溫度改變太大，血清由-20℃直接放入37℃解凍，因溫度改變劇烈容易導(dǎo)致沉淀。
2、血清在室溫或4℃冰箱放置時(shí)間太久，血清中的不穩(wěn)定成分會(huì)被破壞，影響細(xì)胞生長(zhǎng)效果；導(dǎo)致血清品質(zhì)變差，也會(huì)產(chǎn)生沉淀。
3、血清分裝凍存時(shí)，注意在不產(chǎn)生氣泡的情況下?lián)u晃均勻，避免因血清成分濃度改變產(chǎn)生沉淀。
4、血清滅活后容易產(chǎn)生沉淀，如需使用滅活血清，請(qǐng)按56℃，30分鐘，輕微搖晃原則操作，滅活溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。
5、如有血清沉淀，分裝后進(jìn)行離心處理，建議400g離心5分鐘，取上清使用。
結(jié)語(yǔ)：
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